因为毛发基质杂乱、药物浓度低等要素,毛发验毒在法庭毒物解析中具有挑战性。毛发验毒进程包含了取样、去污、水解、提取和仪器解析等多个环节,试验室选用不同的毛发处理方法和解析方法,导致在解析效果上也存在差异。
短少精确浓度的毛发控制样品是毛发验毒范畴的难题。解析效果的精确性和可靠性依赖于质量控制和校正方法，在进行方法有用性验证时应选用相同基质的质控样品，以消除偏倚，增强精确性。试验室的质量控制也应选用相同基质的控制样品，以查询试验室内部的精密度和试验室间的一致性。
无论是浸泡法还是磨粉法制备头发控制样品，都无法对头发中乱用药物解析的整个进程进行质量控制。头发的最外部为毛表皮，由无核的鳞状角化细胞呈叠瓦状而成，不同的人发质不同，有的为多孔性，有的为少孔性。即便同一人的头发之间，多孔性也存在差异。毒物简略进入多孔性的头发，一同,也简略被清洗、开释出。已有的酸水解试验效果表明，同一头发样品纷歧起刻取样，效果存在较大差异。换言之，剪碎浸泡水解的方法不会形成假阴性效果，但或许使定量效果不精确。现在不能承认头发的多孔性是影响此差异的主要要素，可是选用研磨损坏处理头发样品，能够消除由多孔性引起的差错。另一方面，剪碎后酸水解方法有其相对优势，简练有用，头发基质烦扰少，为许多试验室所承受，而选用头发粉末样品则无法查询酸水解方法的开释程度和稳定性等要素。
或许影响萃取的解析参数有：粒度、萃取时刻、能量温度/振动/超声、溶剂种类、溶剂体积和萃取进程的频率。经过损坏头发来减小颗粒大小，已被证明能够显着进步乙基葡萄糖醛酸苷和各种乱用药物的提取率。
毒物可经过多种途径进人毛发，从运用的视点看，最主要的途径为血液循环，学者也期望以此来揣度用药时刻。但实际上，其他入体途径一同存在，导致毛干中的毒物带不如理论上仅有血液循环途径的清晰。毒物进入毛发的速率与黑色素亲和力、亲脂性密切相关，碱性药物更简略进入毛发。
毛发验毒的运用越来越广泛，在进行头发解析的效果解释时应考虑头发颜色、头发生长速度、药物进入毛发的机制、药物在毛干中的保存、稳定性等要素，结合毛发验毒的去污处理、清洗规范、cut-off值、原药与代谢物的比率等多准则进行归纳判别。毒物进入毛发的机制也仍需不断深化研讨，以寻找差异自动啃咬与被动污染的有用方法。